中文名稱：杏仁源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒。

英文名稱：Amygdaline-Derived Material Probe qPCR Kit。

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有杏仁源性成分?，F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供 重要的保障。本公司開發(fā)了簡單快捷的杏仁源性成分探針法熒光定量PCR 檢測試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)杏仁源性成分DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會跟其他物 種的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級。

6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PC 反應(yīng)。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分：

2×Probe qPCR MagicMix ：500μL（紅蓋）

熒光PCR專用模板稀釋液：1mL（綠蓋）

超純水：1mL（白蓋）

杏仁源性成分探針法qPCR引物-探針混合液：150μL（棕色管）

杏仁源性成分探針法qPCR陽性對照(1×10E7 拷貝/μL)：50μL（黃蓋）

使用手冊：1份

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為12個(gè)月

自備試劑樣品：DNA

使用方法：

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。

用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液，最好用帶芯槍，下同。在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6 拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。換槍頭，在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所 得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。換槍頭，在4號管中加入5μL 1×10E5 拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

如果有N個(gè)樣品待提取，最好設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的是PC（樣品制備陽性對照）和NC（樣品制備陰性對照）?？梢匀￡栃詫φ盏?000倍稀釋液10μL再加上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作為PC。另外用水作為 NC。用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)提取試劑盒兼容。

三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4 個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽性對照（用第4號管的陽性對照稀釋液做模 板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）

蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行PCR：

四、數(shù)據(jù)處理

如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品核酸濃度的log值，再推算出其濃度。如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于37。對待測樣品，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于37則為陽性。如果在37-40之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽性。

杏仁源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒僅供科研。