游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒（測(cè)植物組織）

                                               微量法100T/48S

注   意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

FFA既是脂肪水解的產(chǎn)物，又是脂肪合成的底物。FFA的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能有關(guān)，也可反映食物貯藏中的品質(zhì)變化。

測(cè)定原理：

在弱酸性條件下，FFA與銅鹽反應(yīng)生成銅皂，在715nm處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)游離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關(guān)系。

自備儀器和用品：

研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩儀、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。

試劑組成和配制：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存。

樣品中FFA提取：

組織用蒸餾水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，搗碎后按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）加入試劑一，震蕩提取3h，8000g，4℃離心10min，取上清液待測(cè)。

測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到715 nm。

2. 對(duì)照管：取上清液0.4mL，加0.2mL試劑二，充分震蕩5min，室溫靜置5min，取上層200μL于微量石英比色皿/96孔板，調(diào)零。

3. 測(cè)定管：取上清液0.4mL，加0.2mL試劑三，充分震蕩5min，室溫靜置5min，取上層200μL于微量石英比色皿/96孔板，測(cè)定吸光值，記為A。

FFA含量計(jì)算：

a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0075 x+ 0.0055，R²=0.994

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

FFA（nmol/g 鮮重）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)=133×(A-0.0055)÷W

V1：加入樣本體積，0.4mL；V2：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0038 x+ 0.0055，R²=0.994

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1×Cpr)=266×(A-0.0055)÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

FFA（nmol/g 鮮重）= (A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1÷V2×W)=266×(A-0.0055)÷W

V1：加入樣本體積，0.4mL；V2：提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1.        蛋白含量不可直接用提取的上清液直接測(cè)定，可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公司的BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒。

2.        Z低檢出限為2 nmol/mL。