酵母：

酵母是真菌界的一種單細(xì)胞真核微生物，大小從數(shù)微米（多見）到40微米（罕見）不等。 與細(xì)菌污染類似，培養(yǎng)物被酵母污染后也會變得渾濁，特別是進(jìn)入污染后期時。培養(yǎng)物 -被酵母污染后pH值變化極小，污染嚴(yán)重時pH值才會升高。在顯微鏡下，酵母呈單個卵圓形或球形顆粒，有些會芽生出較小的顆粒。下列模擬圖像顯示了貼壁生長的293細(xì)胞接種24小時后被酵母感染。

霉菌：

霉菌是真菌界的一種真核微生物，以被稱為菌絲的多細(xì)胞絲狀體形式生長。這些多細(xì)胞絲狀體構(gòu)成的交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)含有遺傳性相同的細(xì)胞核，被稱為集落或者菌絲體。與酵母污染類似，霉菌污染初期培養(yǎng)物pH值會維持穩(wěn)定，污染加重后pH值會迅速升高，導(dǎo)致培養(yǎng)物渾濁。在顯微鏡下，菌絲體通常呈細(xì)束狀纖維，有時呈較為密集的抱子團(tuán)塊。許多種霉菌的抱子在休眠期均可耐受極-端嚴(yán)峻、不利的環(huán)境，當(dāng)其遇到合適的生長條件時才會 被活化。

病毒：

病毒是一種微觀感染性物質(zhì)，利用宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行復(fù)制。病毒體積極小，因而要檢測培養(yǎng)物中有無病毒以及將其從細(xì)胞培養(yǎng)實驗室所用試劑中去除都十分困難。由于大多數(shù) 病毒對宿主有非常嚴(yán)格的要求，因此一般不會對與其宿主物種不同的細(xì)胞培養(yǎng)物造成不良影響。但是，使用病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)物時卻會對實驗室工作人員造成嚴(yán)重的健康威 脅，特別是當(dāng)實驗室培養(yǎng)的是人或靈長類動物細(xì)胞時。通過電子顯微鏡檢查、一組抗體的免疫染色、ELISA實驗或者采用適當(dāng)病毒引物的PCR技術(shù)可以檢測出細(xì)胞培養(yǎng)物的病毒污染。

支原體：

支原體是一種沒有細(xì)胞壁的簡單細(xì)菌，被認(rèn)為是能夠自我復(fù)制的最小的生物。由于體積 極?。ㄒ话阈∮?微米），支原體的檢測十分困難，除非其達(dá)到極-高的密度，導(dǎo)致細(xì)胞培 養(yǎng)物變質(zhì)，在此之前往往沒有明顯的感染征象。有些生長緩慢的支原體可能會在培養(yǎng)物中持續(xù)存在，而不會導(dǎo)致細(xì)胞死亡，但是這些支原體會改變培養(yǎng)體系中宿主細(xì)胞的行為和代謝。慢性支原體感染的可能表現(xiàn)包括：細(xì)胞增殖速度降低、飽和密度下降以及懸浮培養(yǎng)物凝集；但是，唯-一切實有效的檢測支原體污染的方法就是采用熒光染色、ELISA、PCR、免疫染色、放射自顯影或者微生物學(xué)測定技術(shù)定期檢 測培養(yǎng)物。

交叉污染：

雖然不如微生物污染普遍，但是許多細(xì)胞系與HeLa細(xì)胞及其他生長迅速的細(xì)胞系間廣泛的交叉污染是一個明確的問題，會造成嚴(yán)重的后果。從聲譽好的細(xì)胞庫獲取細(xì)胞系、定期檢查細(xì)胞系的性質(zhì)以及采用良好的無菌技術(shù)是有助于避免交叉污染的慣例方法。通過 DNA指紋圖譜、核型分析和同位素分析可以確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物有無交叉污染。

抗生素的使用：

細(xì)胞培養(yǎng)時不應(yīng)常規(guī)使用抗生素，因為連續(xù)使用抗生素會促進(jìn)抗生素耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在。一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除，這種輕度污染最終將發(fā)展成大規(guī)模污染，而且連續(xù)使用抗生素還會掩蓋支原體感染及其他隱性污染。另外，有些抗生素會與細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng)，干擾您研究的細(xì)胞過程。

抗生素只能作為對付污染的最后手段而且只能短期使用，并應(yīng)盡快撤除。如果長期使用 抗生素，則應(yīng)同時進(jìn)行無抗生素培養(yǎng)，以便作為鑒別隱性感染的對照。